摘要:目的:建立可靠合理的海馬神經元缺氧缺糖(OGD)模型。方法:用培養5 d的海馬神經元細胞,采用三氣培養箱聯合EBSS液,進行OGD造模;于培養0.5、1、2及3 h時收集海馬神經元細胞,倒置顯微鏡下觀察海馬細胞的形態,并采用MTT法通過檢測海馬細胞的吸光度(OD)值繪制海馬神經元OGD損傷時效曲線,篩選海馬神經元OGD最佳造模時間。結果:倒置顯微鏡下可見隨著OGD時間的延長,神經元細胞受損越嚴重,生長狀態越差,胞體從正常的飽滿圓潤,折光性、立體感強,神經元細胞軸突長,形狀粗壯,數量多,與樹突相互交集呈網絡狀;細胞貼壁牢固,變成大部分神經元胞體與自身軸突、樹突連接斷裂,有的胞體,細胞直接從培養板壁上脫落,脫落的細胞堆積在一起;從海馬神經元OGD損傷時效曲線可發現前5 d海馬神經元生長迅速,第5天到達高峰期,第5~7天為平臺期,第8天后活力稍下降;與OGD 0 h(正常)OD值比較,OGD 0.5、1、2及3 h的OD值減低(P〈0.05),表明所采用的OGD造模方法是成功的,OGD 2 h時細胞的損傷程度為正常細胞組30%,可作為正式實驗OGD模型。結論:三氣培養箱聯合EBSS液可進行體外OGD造模,最佳的細胞模型為培養2 h。
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