摘要:【目的】對(duì)白腐菌偏腫革裥菌在木質(zhì)和非木質(zhì)環(huán)境下的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測(cè)序,為白腐菌降解木材的機(jī)制研究提供支持?!痉椒ā坎捎酶咄繙y(cè)序技術(shù)對(duì)木屑和非木屑處理?xiàng)l件下的菌絲樣本進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。利用eggNOG、GO、KEGG等數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行注釋和比較分析,預(yù)測(cè)和篩選出偏腫革裥菌與木材降解有關(guān)的基因。應(yīng)用熒光定量PCR(qPCR)檢測(cè)mnp2等11個(gè)與木質(zhì)素降解相關(guān)的差異基因在木屑處理5天條件下的表達(dá)量,結(jié)合轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)對(duì)這些基因的表達(dá)量變化趨勢(shì)進(jìn)行分析。【結(jié)果】偏腫革裥菌轉(zhuǎn)錄組測(cè)序共得到38.9 Gb Clean Data,各樣品Clean Data平均達(dá)到6.49 Gb,各樣品的Reads與參考基因組的比對(duì)效率在71.23%~74.25%之間。使用edgeR軟件進(jìn)行差異表達(dá)分析,得到差異表達(dá)基因898個(gè),其中上調(diào)351個(gè)、下調(diào)547個(gè)。差異基因被注釋到GO數(shù)據(jù)庫(kù)的有251個(gè),注釋到KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)的有223個(gè),注釋到eggNOG數(shù)據(jù)庫(kù)的有704個(gè)。eggNOG分析表明,差異基因表達(dá)多聚集在能量產(chǎn)生和轉(zhuǎn)換、轉(zhuǎn)錄后修飾、蛋白質(zhì)代謝、伴侶關(guān)系、次生代謝物的生物合成、碳水化合物的運(yùn)輸和分解代謝等功能分類(lèi)下。GO分析表明,顯著性富集與頻率較高的生物過(guò)程是丙酮酸代謝過(guò)程、類(lèi)異戊二烯生物合成過(guò)程、天冬氨酸家族氨基酸代謝過(guò)程和木質(zhì)素分解過(guò)程。在KEGG通路分析中,差異基因分布到86個(gè)不同的生物途徑,差異基因顯著富集的代謝通路主要為:碳代謝、檸檬酸循環(huán)、芳香化合物降解、乙醛酸代謝。qPCR結(jié)果表明在木屑處理?xiàng)l件下基因mnp2、mnp3、lip9、lip2、laccase1和nadp的表達(dá)量明顯上調(diào);mnp10 s、mrp、cyp450-1、GroES1和GroES2的表達(dá)量明顯下調(diào),qPCR與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果在表達(dá)量差異倍數(shù)上存在較小偏差,但整體趨勢(shì)一致,可以證明轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果是正確可靠的?!窘Y(jié)論】偏腫革裥菌降解木材與碳代謝、芳香化合物降解等通路密切相關(guān);與
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