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催化槲皮素生成異鼠李素的重組菌構建及其轉化條件優化

摘要:異鼠李素是一種黃酮類化合物,廣泛存在于銀杏、沙棘、旱柳和枸杞等植物中,具有多種藥理作用。植物來源的O-甲基化酶能對槲皮素羥基進行甲基化,因而構建重組菌高效表達O-甲基化酶可應用于催化槲皮素生成異鼠李素。筆者對大豆來源的O-甲基化酶SOMT-9編碼基因進行了密碼子優化,其密碼子適應指數(CAI)從優化前的0.59,提高為0.87。將優化后的基因SysOMT-9插入表達載體pGEX-2T,構建獲得重組質粒pGEX-SysOMT。將重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3),通過改變誘導溫度及誘導劑濃度,實現了SOMT-9可溶性表達。在此基礎上對其轉化條件進行了優化,其最佳轉化條件為:起始菌量OD600為10,轉化溫度為30℃,誘導劑IPTG用量為0.01mmol/L,助溶劑DMSO質量分數為1%,1%甘油,40μmol/L的S-腺苷基甲硫氨酸和1mmol/L槲皮素。在此條件下,重組菌在12h內,可將127mg/L的槲皮素,轉化生成133mg/L異鼠李素,摩爾轉化率為42%,是優化前的7.8倍。

關鍵詞:
  • 槲皮素  
  • 異鼠李素  
  • 重組菌  
  • 轉化條件  
作者:
裴建軍; 董萍; 徐菲; 趙東霞; 趙林果; 丁崗; 蕭偉
單位:
南京林業大學化學工程學院; 江蘇省生物質綠色燃料與化學品重點實驗室; 南京210037; 江蘇康緣藥業股份有限公司; 江蘇連云港222001
刊名:
林業科技開發

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期刊名稱:林業科技開發

林業科技開發雜志緊跟學術前沿,緊貼讀者,是一本綜合性雙月刊,報道內容范圍包括:經濟林、用材林、防護林、園林綠化以及木竹材加工、人造板制造方面的成果與經驗,堅持指導性與實用性相結合的原則,創辦于1987年,雜志在全國同類期刊中有很重的學術價值。

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