摘要:[目的]本文旨在鑒定重要農業害蟲斜紋夜蛾(Spodoptera litura)氣味結合蛋白基因GOBP2的順式作用元件,為揭示GOBP2的轉錄調控機制和開發基于嗅覺干擾的害蟲防治技術奠定基礎。[方法]利用5′RACE技術克隆GOBP2的5′UTR,確定轉錄起始位點;利用染色體步移技術(chromosome walking)克隆GOBP2的5′側翼區,并利用在線網站預測轉錄因子結合位點;利用PCR克隆GOBP2的5′側翼區逐步缺失片段,并構建到pGL3-Basic載體上;將各重組載體分別轉染Sf9細胞,48 h后收獲細胞并利用雙熒光素酶報告系統檢測轉錄活性。[結果]獲得斜紋夜蛾GOBP2長23 bp的5′UTR,由此確定GOBP2的轉錄起始位點。通過染色體步移獲得斜紋夜蛾GOBP2的5′端調控區2 025 bp的序列,發現啟動子的典型TATA框;針對-1 000 bp序列的轉錄活性分析表明,最強轉錄活性區域位于-243~-207 bp,具有1個增強子;此外,在-971~-891 bp及-890~-811 bp各有1個增強子,在-244~-315 bp存在1個沉默子。[結論]獲得斜紋夜蛾GOBP2的轉錄起始位點及順式作用元件,為進一步研究GOBP2的轉錄調控機制奠定了基礎。
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