摘要:目的 建立一種人細胞周期蛋白依賴性激酶14(CDK14)基因表達熒光定量PCR檢測方法。方法 利用Trizol法提取不同人肺癌細胞株中總RNA,以β-Actin和CDK14分別為內參和目的基因,分別設計特異性擴增引物,建立人CDK14基因表達熒光定量PCR檢測系統并評估其檢測性能。同時將其應用于不同細胞系siRNA干擾前后的CDK14基因相對表達水平檢測。結果 經電泳分析、熔解曲線、產物測序確認人CDK14基因表達熒光定量PCR檢測系統已建立,其特異性良好,重復性佳(CV=7.13%),線性范圍較寬(CDK14與β-Actin分別在Ct值范圍22.47~32.96與15.14~27.55間具有良好的相關性,r^2=0.9844。)。利用該體系檢測發現:在HCC827 D5和H1650細胞中CDK14基因高表達; 在1~3號干擾片段中,1號片段為有效片段。結論 人CDK14基因表達熒光定量PCR檢測方法已成功建立。
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