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陸地棉GhrbcMT基因克隆、表達與功能初步分析

摘要:植物的rbcMT基因編碼核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亞基N-甲基轉移酶(ribulose1,5 bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunitε-N-methyltransferase, rbcMT),可能催化雙功能酶核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亞基14位賴氨酸的ε-氨基的甲基化過程,目前在豌豆、小麥、煙草等中被鑒定出,可能參與調控植物生長發育,但有關GhrbcMT基因生物學功能研究尚未報道。該研究以陸地棉(Gossypium hirsutum L.)為材料,提取葉片總RNA,反轉錄合成cDNA,利用PCR技術克隆棉花核酮糖1,5-二磷酸加氧酶/羧化酶大亞基甲基轉移酶基因(GhrbcMT)全長cDNA,對該基因進行生物信息學分析,采用熒光定量PCR(qRT-PCR)對GhrbcMT基因進行組織特異性表達分析,并用病毒誘導的基因沉默(virus-induced gene silencing, VIGS)技術降低GhrbcMT在植株中的表達水平,同時用乙醇浸泡法提取野生型與GhrbcMT干涉株系的葉片葉綠素進行含量分析。結果顯示, GhrbcMT蛋白質序列存在多個潛在磷酸化與糖基化位點, Loop結構占56.94%,構象靈活。GhrbcMT基因在棉花葉片中特異性表達, GhrbcMT干涉株系的GhrbcMT表達水平顯著降低,棉花出現明顯的生長緩慢、節間距縮短、植株矮小、花藥敗育等表型, GhrbcMT基因表達水平的降低對棉花植株的營養生長和育性具有顯著影響。該研究通過對1,5-二磷酸核酮糖加氧酶/羧化酶大亞基甲基轉移酶功能初步探究,為進一步探究植株生長發育和育性調控機理提供參考。

關鍵詞:
  • 陸地棉  
  • ghrbcmt  
  • 表達分析  
  • 生長發育  
  • 育性  
作者:
張夢娜; 沈麗; Nnaemeka; Ekene; Vitalis; 孫玉強; 柯麗萍
單位:
浙江理工大學生命科學學院浙江省植物次生代謝調控重點實驗室植物基因組學與彩色纖維分子改良實驗室; 杭州310018
刊名:
中國細胞生物學學報

注:因版權方要求,不能公開全文,如需全文,請咨詢雜志社

中國細胞生物學學報緊跟學術前沿,緊貼讀者,國內刊號為:31-2035/Q。堅持指導性與實用性相結合的原則,創辦于1979年,雜志在全國同類期刊中發行數量名列前茅。

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