摘要：本研究旨在優化組織培養法分離小鼠脂肪間充質干細胞(adipose-derived stem cells,ASCs),為研究成骨分化和成脂分化在間充質干細胞分化過程中的相互影響奠定基礎。通過細胞形態學觀察、細胞生長曲線和流式儀器檢測所分離獲得的間充質干細胞的特性,利用CRISPR-dCas9系統在快速促進間充質干細胞成骨分化的前提下觀察其對成脂分化的影響,并通過生化染色、實時熒光定量PCR和免疫細胞學等手段進行分析。結果顯示,接種3~5 d后可見細胞從組織塊周圍爬出,光鏡下可見細胞形態多為成纖維細胞樣的梭形細胞,且形態單一均勻,具有較高的爬出率,可以大大提高脂肪間充質干細胞的分離效率;通過CRISPR-dCas9系統激活Runx 2和Osterix基因后可以促進間充質干細胞的成骨分化,實時熒光定量PCR及油紅O染色結果顯示,CRISPR-dCas9系統可以同時抑制間充質干細胞的成脂分化;通過CRISPR-dCas9-KRAB系統同時抑制成骨相關基因Runx 2和Osterix后可以促進成脂分化。本研究利用組織貼壁法成功獲得了高純度的脂肪間充質干細胞,具有間充質干細胞的特性和分化能力;利用CRISPR系統可以同時過表達Runx 2和Osterix兩個基因,可以在進成骨分化的同時抑制成脂分化,表明成脂分化和成骨分化的相關性,為基因編輯在間充質干細胞誘導分化和臨床應用方面提供了新的思路和方法。