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單純皰疹病毒2型潛伏感染激活模型的建立及潛伏相關轉錄子開放讀碼框架抑制后對潛伏相關轉錄子基因表達的影響

摘要:目的 研究單純皰疹病毒2型(HSV-2)潛伏感染激活中潛伏相關轉錄子(LAT)開放讀碼框架(ORF)抑制后對LAT基因表達的影響。方法 建立HSV-2潛伏感染復發的神經細胞(SHSY5Y)模型。運用相差顯微鏡觀察HSV-2潛伏及激活后SH-SY5Y細胞形態的變化。對病毒在細胞中的潛伏及激發進行PCR驗證并測序。設計3對siRNA,激活誘導后轉染SH-SYSY細胞,相差顯微鏡觀察細胞形態變化,RT-PCR半定量檢測轉染前后LAT ORF表達的改變。結果在存在60 μmol/L阿昔洛韋(ACV)的環境,HSV-2在SH-SY5Y細胞中建立潛伏狀態。病毒在SH-SY5Y細胞中最長可潛伏14d。43℃ 1.5 h誘導病毒潛伏激發,而相差顯微鏡觀察發現,病毒激發后細胞病變從24h到72 h,細胞變性、壞死的程度、數量隨感染時間延長而增加。HSV-2 LAT、糖蛋白G(gG)基因PCR擴增及電泳結果證實病毒在細胞中的潛伏及激活。LAT ORF-siRNA轉染細胞后,LAT ORF mRNA的表達水平在轉染后24、36和48 h分別減少了39%、51%和60%。結論 抑制LAT ORF后能夠抑制HSV-2 LAT基因的表達,為進一步研究LAT ORF在病毒潛伏感染復發中的作用提供了依據。

關鍵詞:
  • 開放讀碼框架  
  • 皰疹病毒2型  
  • rna干擾  
  • 潛伏相關轉錄子  
作者:
孫朝暉; 徐少珊; 危敏; 楊慧蘭
單位:
廣州軍區廣州總醫院檢驗科; 510010; 廣州軍區廣州總醫院皮膚科; 510010; 廣州南方醫科大學基因工程研究所
刊名:
中華生物醫學工程

注:因版權方要求,不能公開全文,如需全文,請咨詢雜志社

期刊名稱:中華生物醫學工程

中華生物醫學工程雜志緊跟學術前沿,緊貼讀者,國內刊號為:11-5668/R。堅持指導性與實用性相結合的原則,創辦于1995年,雜志在全國同類期刊中發行數量名列前茅。

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