時間:2022-07-26 03:45:46
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乙方:_________
甲乙雙方本著互惠互利的原則,通過友好協商簽定以下辦公設備保養/維修協議。
一、本協議服務費總金額為:(大寫)人民幣_________元,(小寫)人民幣_________。
1.服務對象的辦公設備型號_________。(復印機/打印機/傳真機/掃描儀產品)
2.在甲、乙雙方簽定合同之前乙方應對本協議服務對象所包括的辦公設備進行一次免費的全面檢測,確認設備運行情況,并提供詳細的檢測報告。由雙方簽字確認,如果發現故障,需要更換部件,則部件費用由甲方負擔,乙方有責任提供報價給甲方參考,但報價中的部件價格不得高于該設備的生產商在本市授權的維修(服務)中心的部件價格。
二、辦公設備定期維護保養
1.地點:乙方實施上門保養地點為協議包括辦公設備使用所在地。
2.周期:傳真機、復印機產品每月保養一次,打印機、掃描儀產品每季度保養一次。
3.保養報告:每次乙方在為甲方提供保養服務后,需現場填寫“維修召喚報告”,如實反映辦公設備的運轉情況,并由甲乙雙方簽字確認。
4.故障隱患:如乙方在為甲方提供辦公設備保養時發現有故障隱患,需要維修或更換部件,乙方需與甲方協商,由甲方決定是否進行維修或更換部件。
三、辦公設備臨時緊急維修
1.地點:乙方實施上門保養地點為協議包括辦公設備使用所在地。
2.時間:
(1)每周一至周五9:00——17:30(不包括節、假日)為乙方執行本協議的標準時間,乙方在接到甲方維修要求電話后4個工作小時內派技術人員上門對本協議所簽的年保機器進行免費維修保養(如需換部件,部件費另計),不計次數。
(2)如甲方需要乙方在標準工作時間以外進行維修工作,甲方必須在周一至周五的工作時間內提前通知乙方,否則,乙方有權拒絕甲方的要求。
3.在本協議所包括的辦公設備出現故障后要及時通知乙方,并將出現故障的情況如實告知乙方,以協助乙方維修人員做出正確判斷。
4.甲方故障通知后,乙方要在標準時間上門提供維修,如有特殊情況,乙方應及時通知甲方。
5.甲方辦公設備故障嚴重,乙方無法在兩日內修復時,乙方在維修期間要為甲方免費提供備用機。
6.甲方未經乙方同意不應自行維修或由未經乙方書面同意的第三方(設備供應商或直接商)進行維修。
7.更換部件:
(1)部件更換可能會影響辦公設備的功能、性能,乙方要在與甲方協商認同后進行。
(2)乙方為甲方提供的更換部件必須保證為與設備同品牌原裝部件,如有特殊情況,乙方需在與甲方協商認同后更換與原部件應用功能與技術指標相近的部件。
(3)更換部件的費用由甲方承擔,乙方有義務提供部件的報價,供甲方參考確認,報價中的部件價格不得高于設備的生產商在本市授權的維修(服務)中心提供的部件價格。甲方可以在經乙方書面確認的第三家(設備供應商或直接商)處購買部件。
(4)甲方未經乙方同意不應自行更換或雇傭未經乙方書面同意的第三方更換或拆卸部件。
8.乙方為甲方更換的部件在保修期內非人為損壞,乙方需為甲方免費更換、維修。如屬于甲方使用不當或人為損壞時,部件費用由甲方負責。(部件保修期為:從更換此部件起,兩個月止。注:耗材如針、線圈、墨盒、噴頭、鐵粉、碳粉、曝光燈、硒鼓、色帶、電腦軟件不屬于此保修范圍。)
9.書面報告:在維修(更換部件)工作完成后,乙方維修人員應向甲方提供書面報告,并由雙方簽字確認故障已被修復。
10.第三方面的雇傭,雙方必須在得到對方書面批準后,使用被授權雇傭第三方(產品供應或直接商)執行乙方在本協議中的有關義務,否則,未被通知方有權單方面停止此協議的執行。
11.不予保修范圍
(1)因天災、人災等不可抗力的因素引起的損壞。
(2)因未經乙方同意或雇傭第三方修理而引起的損壞。
12.本協議不涉及有關軟件或網絡支持服務。
13.乙方所維修的部件如在規定的保修期限內出現與前次同樣的故障且非人為損壞,乙方應免費維修該故障,如屬于甲方使用不當或人為損壞時,維修費用由甲方負責。(部件保修期及保修內容詳見本協議第三點第8節)
四、機密
1.雙方同意在本合同執行過程中了解到的與雙方有關的內容及數據或信息確認為機密。
2.雙方負責確保其雇員和受雇第三方應嚴格遵守保密義務。
3.甲方對其專有機密信息自行負責。
五、協議生效及協議期限
本協議經甲、乙雙方簽字蓋章后生效,協議期限為_________年_________月_________至_________年_________月_________日。
六、付款方式
1.甲方在本協議簽定日起十日內,付給乙方協議全款。
2.日常維修設備的費用應在維修完畢后十日內一次性付給乙方。
七、協議的終止及罰則
1.如果發生下列情況,甲、乙各方有權單方面立即終止本協議。
(1)在沒有特殊原因的情況下,甲、乙雙方有一方未能履行本合同的義務。
(2)未經甲方同意而私自更換辦公設備部件。
(3)更換部件時,未經甲方同意私自更換非原裝品牌/或假冒偽劣的部件產品,乙方退還甲方所付的部件費用,并免費更換原品牌部件,如果造成設備損壞,乙方要按市場價格進行賠償。
(4)因甲方原因轉賣、轉讓辦公設備時,未經乙方同意將辦公設備移出大廈而繼續要求服務。
(5)未經乙方同意而拖欠乙方貨款。
2.甲方違約而造成本協議的終止,乙方不退協議余額。
八、本協議一式兩份,甲、乙雙方各執一份,具體未盡事宜雙方協商解決。
甲方(蓋章):_________乙方(蓋章):_________
代表(簽字):_________代表(簽字):_________
地址:_________地址:_________
電話:_________電話:_________
傳真:_________傳真:_________
乙方:(進貨方)
加強醫療器械的質量管理,維護消費者合法權益,。明確產品質量責任,加強友好合作。為切實保證產品質量,維護企業形象,依據《醫療器械監督管理條例》、《醫療器械經營企業監督管理辦法》、《產品質量法》等法律規定,甲乙雙方本著平等、合作的原則簽訂如下產品質量保證協議。
一、甲乙雙方必須是合法的醫療器械生產(經營)企業。甲方向乙方提供加蓋印章的本企業《營業執照》、《醫療器械生產(經營)企業許可證》復印件、業務人員的銷售員資格證復印件、身份證復印件及法人委托書原件。乙方向甲方提供加蓋印章的本單位《醫療機構執業許可生》的復印件。
二、甲方保證向乙方提供合法及質量符合國家醫療器械質量標準的醫療器械。醫療器械的包裝、標識、標簽、說明書、批準文號、滅菌批號等應符合國家和行業的有關規定,符合相關產品的運輸、貯藏要求,并提供有關文件以備案。
三、乙方向甲方購入進口醫療器械時,甲方應提供該品種在效期內的《進口醫療器械注冊證》或《進口醫療器械單》、《進口醫療器械檢驗報告書》,并加蓋企業原印章。進口醫療器械必須有中文標識和中文說明書。
四、甲方負責產品的運送,做到票物相符,乙方收到貨物立即驗收,發現短少、破損或外包裝損壞時應及時通知甲方并拒收問題貨物,由甲方負責處理,因沒有及時通知甲方而造成的損失,由乙方承擔。
五、乙方應具備儲存、養護醫療器械的場所及專職養護人員,因乙方保管不當而導致醫療器械質量下降,由乙方負責。(學生打架調解協議書)
六、乙方正常購進的醫療器械如因質量問題甲方應予以退、換貨。如需召回的醫療器械,甲方應及時通知乙方,并及時召回問題醫療器械。。
七、如雙方對醫療器械質量產生爭議,以法定藥檢部門的檢驗報告結果為準,確因甲方所提供醫療器械出現質量問題造成乙方損失的,由甲方承擔全部經濟責任。
八、甲方必須強化知識產權維護,遵守《專利法》和有關的法律、法規,否則出現一切侵權行為及所有經濟賠償由甲方全部承擔。
九、本協議所涉及的條款,與現行法規相悖的以現行法規要求為準。
十、本協議一式兩份,甲、乙雙方各執一份,自簽字之日起生效,本協議有效期自xxxx年xx月xx日起至xxxx年xx月xx日止。十一、本協議未盡事宜由雙方協商解決。
甲方:(蓋章)乙方:(蓋章)負責人:(簽字)
除了科類和身份證閱讀出來的個人信息不可更改外,其他都能改。
1、預報名提交信息后,等正式報名的時候再登錄進去點擊修改已報信息。除了報考單位、報考點、考試方式等關鍵信息不能修改外,其它一般性的報名信息都是可以修改的。
2、如果需要變更部分無法修改的內容,那就需要添加新的報名信息或者在重新注冊,重新填報所有的報考信息,然后生成新的報名號,再繳納報名費,到現場確認時就拿新的報名號去確認。
(來源:文章屋網 )
不少人將家裝全委托家裝公司后,便不再去施工現場,而是在那里坐等驗收。這樣做其實是很不妥當的,因為不少裝修公司為了獲得高昂的利潤,他們往往會采用偷工減料的情況,從而影響到裝修的品質。因此大家應經常抽空到施工現場看看,一方面是為了監督施工,另一方面是為了看看有什么需要幫助的。
2、謹慎支付裝修款
為了確實保護自己的利益,大家在于裝飾公司簽訂合同時,應詳細約定驗收不合格的處理方式,并且大家切勿驗收一兩個地方就急著付款。比較謹慎的做法是:裝修付款應分期進行,盡量讓前面的付款步驟少付,保證自己最后手里還有30%以上的工程款。
3、認真查看材料清單
【關鍵詞】醫療器械 使用管理 維修保養
中圖分類號:R197.39文獻標識碼:B文章編號:1005-0515(2011)12-331-02
1 背景和現狀
隨著醫學科學技術的發展,醫療器械逐漸成為影響各醫療機構社會效益和經濟效益的重要因素。在《醫療器械監督管理條例》(以下簡稱《條例》)實施后,醫療器械的合理安全使用成為了各醫療機構必須遵守的一項明文規定,加之關系到患者和醫療器械使用者的生命安全,因此必須制定規章條例以規范醫療器械的使用。而醫療器械的維修保養作為醫療器械管理中的重要組成部分,直接影響到醫療器械的運行功能和效率。做好醫療器械的維護保養對減少醫療機構運作成本、優化醫療經費結構、提高醫療器械的功能水平從而提高醫療機構的經濟效益具有十分重要的意義[1]。因此,做好醫療器械的使用管理和維修保養顯得至關重要。但目前情況下,各相關醫療機構雖然都努力想做好醫療器械的使用管理和維修保養,形勢卻不容樂觀,仍存在相關影響因素,同時這些因素也使醫療器械難以得到安全、高效益地運行。因此,必須找到該影響因素才能進一步做好醫療器械的使用管理和維修保養并使醫療器械高效運行。
2 醫療器械的使用管理及維修保養存在的問題和不足
2.1 各相關機構在醫療器械的使用管理上存在的問題
2.1.1 法律法規一些概念缺乏權威解釋
有些醫療機構對“醫療器械的使用”中的“使用”理解較表淺,單單理解為在患者身上使用的瞬間行為,所以當執法監管人員檢查其醫療器械并發現其存在過期醫療器械時,他們的解釋是:醫療器械過期后不再在患者身上使用。然而,對“使用”較為全面合理的解釋應為包括醫療器械使用前的購買過程、醫療器械在患者身上的使用過程及醫療器械使用后的處理過程等。但是這一名詞在《條例》中并沒有權威性的解釋,致使個別醫療機構負責人對該詞語的認識不到位或打球,導致醫療器械過期卻不毀形和丟掉。這種現象既背離了《條例》的立法宗旨,也對患者的安全就醫構成了一定的威脅。同樣,“超功能使用” 在《條例》里也沒有明確規定,導致執法人員在對一些農村醫療機構擅自擴大一些醫療器械功效開展診療活動的行為進行立案和定罪時無據可依。
2.1.2 監管部門、涉械單位對相關政策理解和執行不到位
對于監管部門,在對醫療器械的監督管理工作中需要本專業技術人員或掌握多學科專業技術人員,只有對醫療器械這個多學科領域有足夠的認識,才能有效地對各種醫療器械的質量、性能實施監督檢查,使醫療器械得到合理使用。但目前在基層從事醫療器械監管的管理人員多為非相關專業人員,缺乏醫療器械專業技能,使醫療器械的監管工作不能收到預期的效果。對于涉械單位,相關管理人員對醫療器械的合理使用及相關法規仍認識不夠。監管人員在執法過程中發現,許多基層單位的醫療器械管理部門未得到重視,導致從事醫療器械管理工作的人員對醫療器械的使用管理工作掉以輕心。
2.1.3 醫療器械違法案件處理難
在農村的小衛生室里,經常遇到一次性使用器械在被使用后該毀形卻不被毀形的現象。因其經營總資本較低,所以事實上很難按有關法律條規進行合理處罰,這種類型的醫療器械違法案例雖然在農村醫療機構屢見不鮮,縱使有明文規定也難處理,增加了醫療器械使用管理的難度。
2.2 醫療器械的維修保養存在的問題
2.2.1 許多醫療機構對于設備的維護和保養認識仍比較傳統的、片面,認為維修保養是作用在故障發生后,即被動維修。對器械日常的運行狀態缺乏觀察、缺乏預防性維修的意識和方法。
2.2.2 醫療機構中使用醫療器械的工作者多為醫療工作者,缺乏醫療器械工程技術相關的專業知識,對醫療器械的維護和保養的重要性認識不夠,比專業人員更容易導致醫療器械的破損。同時,醫療器械的管理規定中無相關規章制度難以保證醫療器械設備維修管理的有效性。
3 如何做好醫療器械的使用管理和維修保養
從以上幾點我們知道,醫療器械的使用管理存在的問題和不足之處涉及諸多方面,這些問題可導致醫療器械的合理使用難以達到預期的效果。而醫療器械的維修保養存在的問題亦不容忽視。針對以上這些問題,我們可以通過以下方法解決。
3.1 做好醫療器械的使用管理的方法與措施
3.1.1 出臺相關法律,提高執法力度
做好醫療器械的使用管理需要相關法律的支持,以明確執法人員在醫療器械流通領域的職權,明確對未注明期限醫療器械、無菌醫療器械該毀形未及時毀形、未合理使用醫療器械的單位及醫療器械被超功能范圍使用的處罰方案。同時,嚴格規定相關機構把好醫療器械供應商的審核關,對供應商的資質、經銷醫療器械的品種范圍等進行審核,切實把好進貨關口以提高醫療器械準入門檻,確保其質量的合格并對大型或高風險醫療器械檔案備案。促使醫療機構做好醫療器械的使用管理,從而使醫療器械的非法使用現象減少。
3.1.2 開展專業知識及法律法規知識的培訓
醫療器械監管工作及其重要,應將其列入重要的議事日程。定期對就業監管人員開展專業知識和法律法規知識的培訓,努力實現專人專崗的人員配備,打造一支熟練掌握醫療器械監管知識的專業隊伍。當然,所謂“一個巴掌是拍不響”,在對監管人員進行專業知識培訓的同時,還要增強“涉械”相關人員的守法意識和誠信自律意識。提高“涉械”相關人員對醫療器械使用管理的重要性的認識。
3.1.3 提高醫療器械監管工作質量
醫療器械監管工作的技術含量及實施力度是有效遏制醫療器械的違法違規案件發生的重要因素。因此,應切實提高監管人員的工作質量,并促進基層醫療器械監管的技術支撐作用的充分發揮。為此,相關上級機構應為基層單位發放實用的技術資料和醫療器械檢測標準,使其在檢測中有據可依。
3.2 做好醫療器械的維修保養的方法和措施
3.2.1 健全維修保養管理體制
其一,醫療器械的維修保養工作要達到相關監管部門的硬性規定,不僅需要相關部門加大立法力度和執法力度,還需要其制定全面、明確的相關制度和客觀標準,使維修保養工作的程序和驗收有憑有據。其二,將單一的維修保養性質向多元化的維修方向發展,并實現維修行業技術的資源共享,綜合運用各類型人才,促使維修保養行業向技術密集型行業發展,從而提高維修的技術水平。其三,維修保養體制還應包含對領導者、維修人員的責任及事故責任細則的明確規定和對人員培訓與教育、維修經費保障等方面的明確說明[2]。
3.2.2 醫療器械維修保養管理工作分工要明確
首先,設立明確職責的維修保養機構是必不可少的。該機構根據需要分為專職維修保養組和兼職維修保養組兩種。專職維修保養組由既懂得專業技術又懂得相關管理的人員組成,專門負責醫療器械的日常維修保養和管理。而兼職維修保養組雖然技術不是很專業,但其存在也非常重要:一方面,專職維修保養組的人員較少,面對種類多、數量大的醫療器械,如遇到同時有數臺醫療器械需要維修保養的情況,難以在一時間內同時進行操作。這種情況下就需要兼職維修保養組來分擔這些任務,處理較簡單的工作。這樣既落實了維修保養管理工作,又使該隊伍得到壯大,提高醫療器械的使用率[3]。
3.2.3 醫療器械維修保養需要按時檢查
按時檢查包括對日常檢查和定期檢查。其中,日常檢查能保證醫療器械正常運行并及時處理出現的故障,起到預防事故發生的作用。而定期檢查則是一種周期性的檢測維修,是對醫療器械的運行精度、性能檢測,發現是否存在損耗并消除隱患,保證器械的高效率運行,延長器械壽命。
3.2.4 提高維修保養人員的技術水平并健全繼續教育機制
維修保養人員的技術水平直接影響到醫療器械的質量和使用功能,而質量好、能長時間高效運行的醫療器械能提高臨床的診療工作水平,提高疾病的確診率,從而提高疾病對癥下藥的精準度。提高該人員的技術水平,才能提高服務質量和速度。維修保養技術固然重要,技術人員素質水平也同樣重要,故應培養技術人員的敬業精神和為醫療服務的思想,全方位服務于醫療服務工作。而隨著醫學科學技術的日新月異,醫療器械不斷被注入新的元素,精密度和復雜性不斷提高,需要技術人員加強繼續教育,補充和更新專業技術知識,跟進科技前進的步伐,適應高要求的醫療器械維修保養工作。這需要醫療機構重視對技術人員的繼續教育,給予教育經費支持,并定期對其開展相關技能培訓,不斷提高技術人員的維修保養效率[4],繼而帶來醫療機構的高效益。
4 小結
實踐證明,醫療器械的安全合理使用和較好的維修保養能促進器械的安全、高效率運行,給醫療機構帶來社會、經濟上的高效益。因此,強化醫療器械的使用管理和維修保養勢在必行。而在強化過程中,必須針對器械使用管理和維修保養方面存在的問題和不足,采取適合的方法和措施,才能做好醫療器械的使用管理和維修保養的工作。
參考文獻
[1] 李敏,楊方,郭元星.論醫療設備管理與醫院效益[J].醫療衛生裝備,2007,28(5).
[2] 劉軍,于欣堂,趙衛濤,鞠建勛.醫院醫療設備維修工作經驗談[A].中華醫學會醫學工程.
【關鍵詞】 異體移植
摘 要:[目的]研究神經長度是否影響化學去細胞神經的質量及化學去細胞異體神經修復犬神經缺損的適當長度范圍。[方法]切取犬的坐骨神經全長,截取直徑近似段長度12 cm,去除神經外膜的脂肪組織及血管,在50%Triton X100和50%脫氧膽酸鈉中重復消化得到化學去細胞神經;部分神經用于組織學評價,將12 cm神經按順序切割為6段,石蠟包埋制備切片,厚度5 μm。HE染色和Fastblue染色,觀察去細胞程度、神經細胞外基質結構完整性、髓鞘染色強度,觀察每段神經的差異。在體內實驗中,用化學去細胞異體神經橋接犬的坐骨神經缺損,缺損長度分別為8、10 cm組,每組各有6條成年犬,隨訪時間12個月。觀察動物肢體功能恢復、肌電圖變化及再生神經組織學表現,包括HE染色、S100免疫組織化學染色、乙酰膽堿酯酶染色。[結果]去細胞神經全長各段在去細胞程度、結構完整性及殘余髓鞘染色綜合評價中無差異。體內移植實驗結果顯示8 cm去細胞異體神經移植組的犬在術后12個月踝關節可直立行走,而10 cm去細胞異體神經移植組犬12個月時踝關節不能直立行走。肌電圖檢查結果顯示,兩組動物的手術肢體均可記錄到誘發的運動和感覺電位。肌電圖波幅、時限及運動神經傳導速度結果顯示,8 cm移植組明顯高于10 cm移植組(P
關鍵詞:去細胞神經; 異體移植; 再生
Abstract:[Objective]The purpose of this paper is to demonstrate whether the nerve length could affect the quality of acellular nerve and investigate the properly repairable distance of nerve defects with acellular nerve allografts. [Method]Fresh sciatic nerves were obtained from adult dogs and pided into 12 cm long segments. The nerve segments were decellularized via an improved chemical decelluarization treatment as following: Nerve segments were rinsed with cold sterile Ringer's solution and submergedin 5% Triton100 solution 12h ,and then soaked the nerve segments into 5% sodium deoxycholate for 12h. The treated nerve segments were washed in distilled water for 3h. This procedures were repeated once again. In vitro, the degrees of decellularization , demyelination and integrity of nerve fiber tubal of chemically extracted acellular nerves were observed with microscope and assessed by a score system. In vivo,the sciatic nerve of dogs on the right was exposed.In 8 cm grafted group (n=6),a 7 cm segment of sciatic nerve was removed from the midthigh level. In 10 cm grafted group (n=6) , a 9 cm segment of sciatic nerve was removed at the same level. The gaps were bridged with acellular nerve allografts by 8 cm and 10 cm long segments respectively. The followup period was 12 month postoperatively. Motor functional recovery of the right hind following allografting was examined by neurobehavioral, electrophysiological, histological and immunohistochemical assessment. [Result]There was no difference on the degrees of decellularization, demyelination and integrity of nerve fiber tubal among every fraction of the acellular nerve from the two ends to the central portion. In 8 cm grafted group , all survival dogs(n=5) were held upright with the affected hindlimb extended so that the body's weight was supported by the distal metatarsus and toes. In 10 cm grafted group, animals were failed to held upright with the affected hindlimb. Electrophysiological studies showed that elctromyographic activity was observed in both groups.After 12 month the conduction velocity was 321+51 m/s in 8 cm grafted animals and 183+6.0m/s in 10 cm grafted group. In normal animals, the conduction velocity was 1066+164 m/s. The conduction velocity in 10 cm grafted group was lower than 8 cm grafted(P
Key words: Acellular nerve; Allograft; Regeneration
創傷、理化因素及腫瘤等原因可導致周圍神經的損傷,造成長距離的神經缺損。為恢復肢體的神經支配通常需要應用移植物橋接神經缺損。該類移植物的功能是引導神經纖維通過缺損區并長入支配的器官和組織。由于新鮮異體神經移植的免疫學反應,在臨床實踐中自體神經移植一直被認為是“金標準手術”。但是由于切取自體神經帶來的諸多并發癥及供區所限,自體神經替代物修復神經缺損成為研究的重點。人工合成的替代物主要是由具有良好生物相容性和生物可降解材料制備,如PLA(polylacticacid)[1,2],PLGA[poly(lacticcoglycolic)][3]等。合成材料雖然可避免切取自體神經的并發癥及異體神經的免疫反應,但在內部結構上不具備天然神經細胞外基質的三維空間結構,而這種結構對引導神經軸突的生長至關重要。異體神經的MHC(major histocompatibility complex)主要存在于神經的雪旺細胞和髓鞘成份中,近期研究顯示經化學處理的去細胞異體神經可有效降低移植后的免疫反應并促進神經軸突向遠端生長[4,5],從而修復周圍神經的節段性缺損。因此,化學去細胞異體神經已成為一種具有應用前景的自體神經替代物,并對其神經移植物的保存方法進行了研究[6]。然而,在實驗研究中,對下述兩個問題尚未進行深入研究:(1)較長節段神經的化學去細胞處理是否會造成神經斷端與神經中段質量的差異;(2)在大型動物神經缺損修復中有效的長度范圍為多少。上述問題的研究對制備較長的去細胞神經移植物和選擇修復神經缺損的長度具有重要意義。
1 材料與方法
11 儀器及試劑
Medtronic Keypoint肌電圖儀(丹麥),恒溫振蕩器(回旋式,上海),Triton X100(Sigma,美國),脫氧膽酸鈉(Sigma,美國) 。
12 犬化學去細胞神經的制備
已行鈷―鉻―鉬人工假體體內植入實驗并準備取材的實驗犬6條,體重在24~26 kg,用速眠新100 mg肌注后全麻安樂死,取雙側全長的坐骨神經干,每條坐骨神經長約12 cm。將切取的全長犬坐骨神經標記遠近端后,按下述順序進行化學處理:(1)蒸餾水浸浴12 h;(2)50%Triton X100消化12 h;(3)蒸餾水浸浴3h;(4)50%脫氧膽酸鈉消化12 h;(5)重復前述步驟;(6)蒸餾水浸浴3 h;(7)萃取神經在4℃、 pH 72無菌磷酸鹽緩沖液(PBS)暫時保存;(8)將處理好的去細胞神經組織和Hank’s液一起用雙層無毒塑料袋進行分裝,在250 KGy的γ射線下進行輻照滅菌,放置在4℃冰箱中備用。
13 去細胞神經的組織學評價
去細胞處理后的神經組織,將每一神經段按等比例分為6小段,每小段長為20 mm,石蠟包埋,做5 μm厚橫向和縱向組織學切片,進行HE染色觀察去細胞程度及纖維管道結構完整性、Fast blue染色觀察髓鞘成分。按照表1的標準進行去細胞神經的質量評價。每段隨機取3張切片進行觀察,取其均值單項計分。
14 去細胞異體神經移植試驗
健康雜種犬12只,雌雄不分,體重243~266 kg,隨機分成2組,8 cm移植組和10 cm移植組,每組 6只。用25%戊巴比妥鈉(10 mg/kg體重)靜脈注射進行麻醉。在無菌條件下右股后切口顯露坐骨神經干。在坐骨神經干中段分別銳性切除7、9 cm長的神經節段,自然回縮造成8、10 cm長的神經缺損。分別用8、10 cm長的化學去細胞同種異體神經進行移植橋接神經缺損,用8-0無創尼龍線行神經外膜縫合,環形縫合6針。術后分籠飼養,觀察期12個月。
15 體內移植實驗觀察
151 一般觀察 觀察移植后切口愈合及肢體功能恢復。
152 神經電生理觀察 用丹麥產Medtronic Keypoint便攜式肌電圖儀進行運動和感覺誘發電位的檢測。隨機選取左側非手術側肢體5例作為正常值對照。在全麻下手術切開顯露待測神經。
在進行運動誘發電位檢查時,將刺激電極放置在移植段神經近側2 cm的正常神經上,記錄電極放置在小腿三頭肌上,通過給予相同劑量的方波刺激比較兩組實驗動物在運動誘發電位波幅和時限上的區別。左側肢體電極放置在相應位置,刺激參數為:10~20 mA,01 ms,10 Hz。
在進行感覺誘發電位觀察時,刺激電極放置在踝關節部的脛神經上,記錄電極放置在移植段近側的正常神經上。刺激參數為50~100 mA,02 ms,19 Hz。
運動神經傳導速度檢查時,在移植側,近端刺激電極位于移植段近端吻合口近側2 cm處,遠端記錄電極位于移植段遠端吻合口遠側2 cm處,兩實驗組距離分別為12、14 cm。在對照側,兩點位于與右側相應部位的坐骨神經干上,間距10 cm。刺激參數為10~20 mA,02 ms,10 Hz,肌電圖儀自動記錄并計算運動傳導速度。
153 再生神經的組織學觀察 在過量麻醉藥物的作用下處死實驗犬并即刻觀察取材。對實驗組全部動物的移植段神經的近側吻接口、移植段中央、遠側吻接口、移植段遠側神經和神經支配區域的靶肌肉進行神經再生的組織學觀察。
1531 HE染色 將切取的移植神經及兩端各1 cm正常神經取出后浸于4%多聚甲醛水溶液中固定24 h,經脫水處理后分段用石蠟進行包埋,連續組織學切片,切片厚度為5 μm,蘇木素-伊紅染色后觀察組織結構形態,再生神經纖維和細胞浸潤情況。
1532 S-100免疫組化染色 標本為石蠟包埋,切片厚度5 μm。Ⅰ抗為兔抗S-100蛋白抗體,Ⅱ抗為生物素標記的羊抗兔IgG抗體。用于觀察再生神經中的許旺細胞的分布情況,特別是移植段神經中許旺細胞的分布。
1533 美藍復紅染色 在移植段中央和移植段遠側的神經中各取2 mm×1 mm×1 mm大小的組織塊用05%戊二醛固定24 h,樹脂包埋后用于半薄切片美藍復紅染色,切片厚度2 μm,染色后觀察有髓神經纖維。
1534 透射電鏡觀察 將經05%戊二醛固定后樹脂包埋的神經組織行超薄切片,醋酸鈾和枸櫞酸鉛雙重染色。在SEM透射電鏡下觀察再生神經的超微結構。
1535 靶肌肉運動終板染色 在脛神經進入小腿三頭肌肌腹部位切取3 mm厚的肌肉塊,在含1%氯化鈣的 10%福爾馬林水溶液中固定24 h,取出后放置在蔗糖-凝膠溶液中,行冰凍切片,切片厚度為30 μm。用膽堿酯酶法進行運動終板染色,觀察靶肌肉中再生的運動終板的形態。每張切片隨意選3個視野計數運動終板數量,取其平均數。
16 統計學分析
用SPSS 115統計分析軟件進行數據處理,組間對比用成對資料的t檢驗,P
2 結 果
21 去細胞神經各段間組織學觀察結果
神經全長從近端到遠端去細胞完全,評分均為0分;在結構觀察中,除第2段為0分外,其余5段均為1分,存在輕度的結構破壞:觀察髓鞘染色強度,神經全長均為1分,仍殘留少部分髓鞘成分。綜合評分第1段為2分,第2段1分,第3段到第6段均為2分,神經全長各段經去細胞處理后綜合評分相似(見表1)。 表1 化學去細胞神經評分標準
22 移植動物一般情況和功能觀察
8 cm組有1犬在移植后3個月并發肺部感染死亡。10 cm組有1犬在4個半月腹瀉死亡。其余動物均存活至觀察期滿。 在8 cm組實驗犬在移植術后3個月時均有不同程度運動功能的恢復,至6個月時恢復了較好的行走功能,但是外觀上仍有輕微的跛行,12個月時在行走過程中踝關節可以完全直立和有較好的背屈。10 cm組在6個月時也有不同程度的下肢功能恢復,但是進展較慢,移植后12個月踝關節仍不能直立或爪背著地。
23 神經電生理觀察
在移植段近側的正常神經上給予電刺激時,8 cm組和10 cm組均在小腿三頭肌上記錄到誘發的運動神經傳導電位。如表2所示移植術后12個月記錄到的運動誘發電位時限和波幅的區別,8 cm組的波幅高于10 cm組(t=3286,P
24 再生神經組織學觀察
大體上觀察,8 cm組在局部切開檢查時,移植段神經與周圍組織有輕微的短縮,可見移植段神經有良好的連續性,無明顯變細變硬。神經與周圍組織有少量的粘連,再血管化良好。近側和遠側吻接口無神經瘤形成。神經支配區的肌肉組織有輕度萎縮。10 cm組在切開檢查時,可見移植段神經的遠側段明顯變細變硬,但是仍然保持連續性,神經與周圍組織有粘連,神經支配區肌肉萎縮明顯。 表2 去細胞異體神經移植術后12個月肌電圖結果光鏡下,在兩組移植段神經內均有S-100表達陽性的雪旺細胞,沿神經纖維方向呈帶狀排列(圖1),8 cm組的數量多于10 cm組。移植段以遠的神經內亦可見到雪旺細胞增殖成帶,神經橫切面顯示有再生的神經纖維,8 cm組優于10 cm組,在10 cm組可見較多神經束呈脫髓鞘改變。
運動終板染色顯示在神經支配區的小腿三頭肌中可以見到重新形成的運動終板結構,兩組實驗犬在運動終板數量上有較明顯的差別,8 cm組再生的運動終板數量多于10 cm組,終板的形態也優于10 cm組(圖2)。每個高倍視野下的運動終板的數量在8 cm組明顯多于10 cm組,有顯著統計學差異(P10 cm組。但是兩組終板和正常的終板結構相比不管是在終板的數量還是在終板的縱橫徑上均有差別(P
電鏡下8 cm組移植段神經內可見由雪旺細胞形成的髓鞘和有髓神經纖維,同時可見大量的無髓神經纖維呈束狀分布(圖3);10 cm組移植段神經內也有少量有髓神經纖維形成。表3 去細胞異體神經移植術后小腿三頭肌運動終板測量
3 討 論
在異體神經移植的研究中,雖然經凍融處理、放射處理和化學處理后的異體神經均具有促進神經再生的功能,但由于凍融處理及放射處理的神經細胞碎片仍殘存在神經的基底板層管內,妨礙神經軸突向遠端的延伸,因此修復神經缺損的距離一般較短。而化學處理后的異體神經在降低免疫原性的同時,保留了神經纖維管道的結構完整性,其內部細胞碎片已被清除,去除了軸突生長的障礙,因此可用于修復較長距離的神經缺損。但在化學去細胞處理過程中,當為修復較長距離的神經缺損而處理較長神經段時,神經的兩端與中央部位是否存在質量差異,對修復神經缺損有較大的影響。化學浸提液是從神經的兩端還是透過神經外膜對神經進行去細胞處理存在爭議。實驗中從去細胞程度、髓鞘提取的程度及神經纖維管道的完整程度進行評價。結果顯示在長12 cm的神經段中,經化學去細胞處理后,神經的中央部分與兩端的各段間在上述三個方面的綜合評價中無差異,說明對同等粗細的神經其長度并不影響其神經移植物的質量,由此可以推斷化學浸提液并非從神經的兩端而是從神經的外膜開始進行去細胞處理。故在用相同的浸提液及處理程序進行去細胞處理時,神經的長度對神經移植物質量無影響。
雖然在理論上可以應用化學去細胞的方法處理任意長度的神經,但在實驗及臨床應用中移植長度仍然影響肢體功能康復的結果。在早期的研究中應用化學去細胞異體神經較滿意修復了犬5 cm長的坐骨神經缺損[7]。在應用相同方法處理的犬的化學去細胞異體神經移植實驗中,對犬的8、10 cm 長的坐骨神經缺損用化學去細胞同種異體神經進行移植修復。結果發現在8 cm長的坐骨神經缺損修復組,無論是肢體功能的大體觀察還是電生理的觀察,均恢復較好。運動神經的波幅已達正常神經的50%,神經傳導速度達到正常神經的30%;而在10 cm長的神經移植組,功能恢復較差,肌電圖波幅及運動神經傳導速度均未達到正常神經的20%。再生神經的組織學觀察顯示8 cm長的去細胞神經移植組在雪旺細胞、有髓神經纖維的分布及運動終板的數量和形態方面均明顯優于10 cm移植組。
在8、10 cm神經移植組,其移植物本身的質量無差異,但最終結果具有明顯的差異。產生這種差異的原因不在移植物本身,而與神經缺損的距離有關。Haase等[8]用去細胞異體神經橋接大鼠腓神經缺損,研究顯示去細胞異體神經可以修復2 cm的周圍神經缺損,當缺損>4 cm時未出現功能恢復,并認為生長因子可能有助于修復較長的神經缺損。但在隨后的實驗中應用血管內皮生長因子與去細胞異體神經復合后移植修復神經缺損,僅表現出促進近端吻合口軸突的生長,并未顯出促使神經軸突延長的作用[9]。出現這種現象的原因可能是生長因子雖有促神經再生的作用,但在修復區內未能呈現生理環境下的濃度梯度變化,故軸突的生長方向受到干擾。在周圍神經損傷后,靶器官通過神經遠端釋放不同的生物因子,發揮化學趨化作用,促使神經軸突向遠端生長。生物因子的濃度呈現明顯的梯度改變趨勢,隨距離的增加,生物因子的濃度發生明顯的變化,從而影響神經的再生速度及肢體功能康復。因此,在使用生長因子促使神經向遠端生長時應考慮其作用環節及濃度梯度變化。
本研究證實神經的長度并不影響化學去細胞神經制備的質量,在應用去細胞異體神經修復周圍神經缺損中,8 cm或許是目前單獨使用化學去細胞異體神經移植取得較好結果的最大范圍。為修復更大范圍的神經缺損,應探討神經遠端的生物因子表達分布規律,利用化學趨化原理促進神經的快速生長。
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乙方(經銷商):_____________
一、 甲方責任
1.甲方負責提供符合甲方企業標準的優質合格產品給乙方。
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4.乙方在接到客戶投訴后首先應自行設法盡快為客戶解決,確實不能自行解決的應及時向甲方及時反饋產品情況,以便甲方作出相應處理。
5.乙方如有產品無法自行維修,需返回甲方維修的,一定要應事先與甲方售后專職負責人員溝通,經甲方同意后才能夠將貨物發給甲方,收貨人應寫售后服務部負責人的姓名,否則甲方可以不予處理。
三、售后服務相關費用確認
1.所需更換的零配件費用
① 保修期內,因本身產品質量問題,甲方將1:1免費為乙方提供更換的零配件。
② 保修期內,因非產品質量問題(人為損壞或其他引起),如需要更換零配件,則按甲方零配件價格表收取費用。
③ 保修期外,出現產品質量問題或者是非產品質量問題所引起的零配件更換,均按甲方的零配件價格表收取費用。
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② 保修期外,非產品質量原因由甲方視產品具體情況向乙方收取一定的維修服務費用。
四、本協議由甲方銷售部簽定,售后服務部執行,銷售部監督執行。
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3、 乙方施工人員不得使用已經安裝完畢的潔具、炊具以及其他設施、設備。
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5、 本工程施工期間和保修期間內如因施工質量問題導致相鄰居民住房的管道堵塞、滲漏水、停電、物品毀壞等事故發生,引起財產損失的,由乙方負責修復及賠償。
6、 本工程保修期為兩年,自竣工驗收合格之日起計算。在保修期內,損壞后經過修理部分,保修期順延,但最多不超過____年,保修期內費用由乙方全部承擔。
7、 乙方應在接到甲方報修電話的____小時內做出響應,在____小時內到達現場。如果由于乙方施工質量問題而導致報修,在甲方報修以后____小時內仍未能解決問題,甲方可以先行修繕,并就因修繕支出的費用,自支付該費用之日起至乙方實際履行質量保證責任止的期間,按照中國人民銀行同期貸款利率,要求乙方予以賠償。
8、 為了保證工程的正常進行,乙方必須至少提前____天書面向甲方提出下一工序需要的甲方提供材料清單,并注明該所需材料的數量。實際施工中,該材料數量的損耗不得超過____%.
9、 合同簽訂時未確定具體施工方案、工程量、圖紙的項目應在該項目施工前____天由乙方確定和提交,經甲方簽字確認后開工,乙方自行增加的項目和未經甲方確認超過工程量____%的部分,發生的費用和返工費用由乙方承擔。
10、 本合同甲方供貨清單中以外的材料和工器具均由乙方提供,相關費用已包含在合同總價內。
11、 甲方提供材料運到樓下交貨,由乙方負責搬運至樓上施工,搬運等相關費用已包含在合同總價內。
12、 增加、減少的工程項目,在施工驗收完成后一次結清。
13、 雙方爭議協商解決不成時,任何一方均可根據中國法律的有關規定,向有管轄權的人民法院提起訴訟。
14、 本協議自甲乙雙方或其授權代表簽字蓋章之日起生效。
15、 本協議一式兩份,甲、乙各持一份,具有同等效力。
本補充協議于____年____月____日訂立。
甲 方:
承包方(以下簡稱乙方):
為了確保 ,需 ,依照《中華人民共和國合同法》、《中華人民共和國建筑法》及其他有關法律、法規的規定,遵循平等、自愿、公平和誠實信用原則,雙方就本建設工程組織施工事項協商一致,特訂立本協議。
一、工程名稱:
二、工程地點:
三、工程施工范圍及技術要求:詳見施工圖紙及工程量清單。
四、工程造價:本工程預算價為萬元
元整)(詳見工程預算書)。
五、承包方式:包工包料。
六、結算方式:本工程結算時委托有資質的中介機構結算審核下浮率為 ,工程量按實計算。根據施工圖紙及現場實際發生工程量計算,信息價、勞保費用、定額套用及取費標準等按本工程預算標準執行。
七、付款方式:
工程竣工驗收合格并經審核決算后支付工程決算審核總造價的90%, 余款10%作為保修金,待保修期滿后一個月內付清。
八、工程工期
工期總日歷天數為 天,自 年 月 日至 年 月 日。因雨季和甲方原因造成工期延誤,由乙方書面申請經甲方確認后,工期可予以相應順延。若乙方未按約定的日期完工,超過5天后,每延期一天扣工程款300元。
九、施工要求
1、乙方必須嚴格按照甲方技術要求及核定的工程數量進行施工,按時保質保量完成,工程質量標準須達到合格以上。
2、乙方應自覺提高安全生產意識,做好現場安全防護措施,確保施工安全,施工過程中一切安全責任及措施費用概由乙方負責。
十、其它事項
1、乙方必須具備相應的施工資質,經甲方認定后方可簽訂施工協議。
2、乙方必須協調解決本工程施工中的糾紛和相關事宜。
3、本工程完成后,由乙方書面申請報甲方審批后方可進行驗收。
4、驗收時,若乙方未按圖紙施工,乙方須在15日內整改到位,否則甲方不予支付工程款。
5、本工程質量保修期為個月,質量保修期自工程竣工驗收合格之日起計算,保修期間發生質量問題一切保修費用由乙方承擔。在甲方書面通知3日內,乙方未進場修復,視為自動放棄保修金,由甲方委托它方維修。
6、
十一、本協議共股壹份、辦公室存檔壹份),乙方執壹份,自雙方簽字蓋章之日起生效。 附件:施工圖紙及工程預算書
甲 方(蓋章): 乙 方(蓋章):